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2019年 第39卷 第5期    刊出日期：2019-05-05

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研究论文

乙肝病毒X蛋白抑制小鼠足细胞系MPC5增殖并促进其凋亡

雷晓燕 孙永红 陈星星 崔维静 刘璟

2019, 39(5):  617-622. 

摘要 ( 306 )   PDF (1561KB) ( 466 )  

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目的 探讨乙肝病毒X蛋白（HBx）对条件永生型小鼠足细胞系（MPC5） 增殖与凋亡的影响。方法 采用携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证转染效率。实验分3组，即HBx转染组(MPC5-pEX-HBx group):脂质体+HBx-质粒; 阴性对照组(MPC5-pEX-neo group)：脂质体+空质粒；空白对照组(MPC5 group)：脂质体组。MTT法检测HBx对足细胞存活率的影响；流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；Western blot法检测各组细胞中Nerhrin、STAT3、JAK2蛋白表达水平。结果 pEX-HBx 转染MPC5细胞后48小时HBx表达最高。HBx转染组中Nephrin蛋白表达水平显著低于空白对照及阴性对照(P值均＜0.01)。转染HBx基因后足细胞增殖明显受抑，同时凋亡率显著增高（P值均<0.01），此外HBx转染组STAT3及JAK2蛋白表达较空白对照及阴性对照组均显著增高（P值均<0.01）。结论 HBx可下调足细胞中nephrin蛋白表达，抑制足细胞增殖，并促进其凋亡的发生，作用机制可能与STAT3/JAK2信号通路活化有关

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

步雪峰 章安伟 尹超云 张烜烽 陈正威 张日婷 严玉兰

2019, 39(5):  623-629. 

摘要 ( 281 )   PDF (4744KB) ( 428 )  

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目的 探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒（rL-RVG）通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法 将对数增殖期的胃癌细胞株SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒（NDV）组、PBS组，并同时分别设乙酰胆碱受体（α7-nAChR）抑制剂及激动剂预处理组。病毒感染24 h，CCK8法测定病毒对SGC增殖影响，蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV ；凋亡蛋白cleved-caspase3、BAX/BCL-2；P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果 随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加，胃癌细胞活力下降，rL-RVG在10-2抗增殖作用显著(P<0.05)；病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase 3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高，且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显，乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高，胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P<0.05)；P-ERK在病毒组表达下降，且rL-RVG组较NDV组更低，乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P<0.05)。结论 rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。

优化海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架用于人脐带来源间充质干细胞的体外扩增

刘雨杰 赵锦 何志旭 曾令文

2019, 39(5):  630-635. 

摘要 ( 261 )   PDF (2991KB) ( 236 )  

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目的 通过制备及优化海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架用于人脐带来源的间充质干细胞体外扩增，为干细胞在组织工程中的应用与疾病治疗提供实验基础。方法 通过制备海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架，并接枝多聚赖氨酸对其优化。然后，从产妇脐带中分离出间充质干细胞，接种在复合支架表面，监控其增殖情况。利用细胞计数法和CCK-8试剂盒，绘制细胞增殖曲线，并用β-半乳糖苷酶衰老检测试剂盒评估干细胞的衰老程度。结果 成功制备并优化了海藻酸钠-壳聚糖复合支架，发现在接枝多聚赖氨酸的支架上接种间充质干细胞，细胞能够很好地附着，覆盖在复合支架表面，且能快速增殖。结论 优化的海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架能为细胞增殖提供优良环境，具备体外扩增间充质干细胞的可行性，可作为组织工程应用的潜在材料。

川崎病对儿童肠道菌群的影响

沈男 王莹 王兴翠 张红霞 汪志慧 张磊 盖中涛

2019, 39(5):  636-640. 

摘要 ( 321 )   PDF (2638KB) ( 347 )  

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目的 探讨儿童川崎病对肠道菌群的影响。方法 PCR扩增川崎病患儿和健康儿童粪便样本中16S rRNA基因的V1~V2可变区，并在高通量测序后进行细菌学分类。通过α多样性、β多样性、线性判别分析和LEfSe差异分析比较两组间差异。结果 川崎病组的肠道菌群丰度(Ace指数)和结构(非加权ANOSIM)均发生了明显改变(分别为P<0.001和P<0.01)。显著差异菌变化为：乳酸杆菌属（P<0.01）、韦荣球菌属（P<0.01）和梭菌属（P<0.001）丰度减少；拟杆菌属（P<0.05）、肠球菌属（P<0.001）和副杆菌属（P<0.001）丰度增加。结论 儿童川崎病存在肠道菌群紊乱。该结果为后期的川崎病微生态学研究提供了部分依据。

腺瘤样结肠息肉基因在人肝癌细胞系BEL-7402脂肪代谢过程中对线粒体的影响

刘静 林国南

2019, 39(5):  641-645. 

摘要 ( 266 )   PDF (2362KB) ( 259 )  

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目的 观察在人肝癌细胞系脂肪代谢过程中，腺瘤样结肠息肉基因（APC）对细胞线粒体的影响。方法：给人肝癌细胞（BEL-7402）细胞转染APC基因敲减质粒，并用油酸（oleic acid，OA）刺激各组细胞，使细胞产生脂质堆积。油红O染色法检测各组细胞脂质堆积情况；使用ATP含量检测试剂盒检测各组细胞ATP含量；使用荧光探针标记法检测各组细胞内氧自由基（ROS）的含量 。结果：给细胞转染质粒后，APC基因的mRNA表达量降低（P<0.05），蛋白表达也降低（P<0.05）；与对照组细胞相比，APC基因敲减组细胞加油酸刺激后细胞脂质堆积减少（P<0.05），ATP含量增高（P<0.05），细胞内氧自由基数量降低（P<0.01）。结论：APC在人肝癌细胞系脂质代谢过程中影响线粒体的生理功能。

小檗碱促进巨噬细胞系RAW264.7由M1促炎表型向M2抗炎表型极化

王青竹 石婧 刘琴 杨黎星 郭磊 叶菜英 张德昌

2019, 39(5):  646-651. 

摘要 ( 1880 )   PDF (644KB) ( 727 )  

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目的 探讨小檗碱(BBR)对 RAW264.7 巨噬细胞极化分型的影响。方法 将 RAW264.7 细胞分为对照组、高脂和炎性反应模型组(以100 μg/L 脂多糖和100 μg/L 聚合型低密度脂蛋白刺激) 和小檗碱低、中、高浓度（5、10、20 μmol/L）处理组。用ELISA和流式细胞计量术检测巨噬细胞两种极化分型( M1 型和 M2 型)相关标志物TNF-α、MCP-1、CD86、IL-4、IL-13、TGF-β1和CD206的表达，以观察细胞极化。用Western blot和RT-qPCR检测载脂蛋白 E(apoE)、极低密度脂蛋白受体(VLDL)或载脂蛋白E受体2(apoER2)的表达。结果 BBR引起M1型巨噬细胞相应标志物TNF-α、MCP-1和CD86表达减少(P<0.05)； M2型巨噬细胞相应标志物IL-4、TGF-β1和CD206表达增加。同时也能够促进RAW264.7细胞内apoE的蛋白表达和VLDL的mRNA表达(P<0.001)。结论 BBR可能促进apoE与VLDL的结合，进而诱导RAW264.7从M1促炎表型向M2抗炎表型极化。

慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者血管平滑肌细胞中FoxO3a和MMP2表达升高

王峰 甄雅楠 刘晓鹏 林凡 刘鹏 温见燕

2019, 39(5):  652-656. 

摘要 ( 345 )   PDF (3677KB) ( 234 )  

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目的 研究FoxO3a及MMP2在慢性血栓栓塞性肺动脉高压（CTEPH）中的表达和作用。方法 收集CTEPH患者20例，选取5例清洁手术标本，原代培养得到患者肺动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）；利用供体肺动脉主干作为对照，原代培养得到正常肺动脉VSMCs。免疫组织化学染色及Western blot检测血管组织及VSMCs中FoxO3a和MMP2表达。结果 疾病组FoxO3a的积分吸光度值（IA）为：3269±338，显著高于对照组的420±46（P＜0.01)；MMP2的IA分别为1799±139、4936±521（P＜0.01)；FoxO3a 和MMP2在疾病组表达较对照组明显升高（P＜0.05）。结论CTEPH患者肺血管中FoxO3a和MMP2高表达，这两种信号分子可能参与了CTEPH血管重塑的过程。

颈动脉粥样硬化患者中血管平滑肌细胞的变化

崔艺耀 吕晓烁 刘鹏 潘琳 樊雪强 叶志东 温见燕

2019, 39(5):  657-662. 

摘要 ( 293 )   PDF (3507KB) ( 385 )  

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目的 探讨血管平滑肌细胞（VSMCs）在颈动脉粥样斑块中的数量与分布，为临床分析颈动脉粥样硬化斑块的稳定性提供理论依据。方法 对68例颈动脉内膜剥脱术（CEA）患者的斑块，采用Movat染色和免疫组化方法检测斑块中VSMCs，镜下分别统计VSMCs 平均积分吸光度值（MA）、单位面积的MA和纤维帽厚度。结果 无症状组稳定性和不稳定性斑块发生率为87.5%和12.5%（P<0.001）；症状组为25.0%和75.0%（P<0.001）。VSMCs在无症状组和症状组中的MA值分别为1650±58和1343±54（P<0.001）；在稳定和不稳定性斑块中分别为1506±59和1312±58（P<0.05）。无症状组和症状组中VSMCs分布单位面积的MA值分别为：基底部1664±73（MA /mm2）、1112±69（MA/mm2）（P<0.001）；肩部1697±76（MA /mm2）、1412±81（MA /mm2）（P<0.05）；纤维帽1620±65（MA /mm2）、1321±66（MA /mm2）（P<0.01）。随着纤维帽的增厚，VSMCs的单位面积的MA也随之增加，呈正相关性（P<0.001）。结论 症状组和不稳定性斑块中VSMCs的数量、密度均少于无症状组和稳定斑块，纤维帽的厚度与VSMCs的密度呈正相关性。

基于转录组测序鉴定自噬在小鼠精子发生过程中的动态变化

王晗 李怡然 李凯 卢艳 邹定峰 欧金环 缪时英 王琳芳 宋伟

2019, 39(5):  663-667. 

摘要 ( 390 )   PDF (2904KB) ( 468 )  

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目的 基于NCBI数据库中的小鼠精子发生3个时期（精原细胞、粗线期精母细胞、圆形精子）的转录组测序数据，系统地揭示自噬通路及自噬相关基因在精子发生过程中的动态变化规律。方法 从 GEO数据库中下载精子发生3个时期的RNA-Seq数据（GSE100964），对相邻阶段的差异表达基因分别进行代谢通路富集分析。从Autophagy Database里面取出783个自噬相关基因，对其中在精子发生3个时期的平均表达值大于1的636个自噬相关基因的表达量进行热图展示。结果 发现精原细胞和粗线期精母细胞之间的差异表达基因可以显著富集到自噬通路和自噬相关的通路，而粗线期精母细胞和圆形精子之间的差异表达基因不能富集到自噬相关通路。此外，还发现636个自噬相关基因在精子发生过程中有3种主要表达模式。结论 自噬在精子发生减数分裂起始前后的RNA水平发生了显著的变化，且自噬相关基因在精子发生过程中呈阶段特异表达。

DNA甲基转移酶在前列腺癌中的表达及其对体外细胞增殖及侵袭能力的影响

李亚林 刘冉录

2019, 39(5):  668-672. 

摘要 ( 293 )   PDF (2283KB) ( 262 )  

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目的 探讨DNA甲基转移酶（DNMTs）在前列腺癌（PCa）组织及前列腺癌细胞系中的表达情况及其对体外前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法 收集24例患者的前列腺组织样本，其中前列腺癌组织样本12例，良性前列腺增生组织样本12例。免疫组织化学染色检测DNMT1、DNMT3b的表达。通过Western blot及RT-qPCR检测前列腺癌细胞系（DU145、PC-3）及人正常前列腺上皮细胞系（RWPE-1）中DNMT1、DNMT3b的表达。使用siRNA分别下调DU145细胞系中DNMT1、DNMT3b表达，检测DU145细胞生物学行为的改变。结果 DNMT1、DNMT3b在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织（P＜0.05）。DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3细胞系中的表达高于RWPE-1细胞系（P＜0.05），且DNMT1、DNMT3b在DU145中的表达高于PC-3（P＜0.05）。下调DU145细胞中DNMT1、DNMT3b的表达，可显著抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，减弱细胞迁移及侵袭能力（P＜0.05），其中DNMT1抑制组效果最显著。结论 DNA甲基转移酶（DNMT1、DNMT3b）在前列腺癌中的表达高于正常前列腺，其中DNMT1对细胞生物学行为影响最显著。

小鼠卵母细胞减数分裂过程中PAK1与survivin的亚细胞定位和蛋白水平相关

王思敏 周晴 王倩 梁元晶 翁静 马伟

2019, 39(5):  673-676. 

摘要 ( 249 )   PDF (1050KB) ( 227 )  

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目的 研究小鼠卵母细胞减数分裂进程中，活化的PAK1（pPAK1Thr423）在survivin的时空定位和蛋白水平维持中的相关性。方法 利用免疫荧光染色法分析减数分裂进程中 pPAK1Thr423与survivin的时空相关性；利用Western blot分析PF3758309对survivin蛋白水平的影响。结果 在小鼠卵母细胞第一次减数分裂中期（MI），pPAK1 Thr423和survivin共同聚集在MI期同源染色体臂间以及着丝粒上，在第二次减数分裂中期（MII），两者仍旧共同集中在着丝粒上，其在染色体臂间的聚集仅限于姊妹着丝粒之间的区域；PF3758309处理引起survivin蛋白水平的降低。结论 小鼠卵母细胞减数分裂过程中pPAK1 Thr423可能通过调控survivin在染色体臂间和着丝粒上的聚集和有效水平的维持而参与CPC调控染色体分离的过程。

miR-138在乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2氧化应激中表达增加

王圣凯 胡苏琴 吴玲 吴杭菲 郑靖宇 蒋自培 李剑敏

2019, 39(5):  677-681. 

摘要 ( 274 )   PDF (610KB) ( 226 )  

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目的 观察miR-138对乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2的Sirt1表达及其下游氧化应激和线粒体凋亡相关蛋白表达的影响。方法 将心肌细胞分为对照组（control组）、乙醇组（E组）、miR-138抑制剂组（I组）。分别用不同浓度的含乙醇的细胞培养液培养，MTT法检测H9C2细胞的活力，选择细胞活力接近80%的200 mmol/L乙醇浓度为最佳干预浓度。用Lipo2000，将miR-138抑制剂转染I组H9C2心肌细胞，孵育12 h后，分别用羟胺法测定心肌细胞中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、TBA法测定心肌细胞丙二醛（MDA）含量、用RT-qPCR检测心肌细胞内miR-138与Sirt1 mRNA的表达、用Western blot测定心肌细胞内Sirt1、Bcl-2、Bax 和caspase-3蛋白的表达。结果 1）乙醇可以抑制心肌细胞的活力。2）与对照组相比，乙醇组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量、Bax和caspase-3的蛋白表达均明显升高（P<0.05），T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达及Sirt1和Bcl-2蛋白的表达均明显降低（P<0.05）；与乙醇组相比，miR-138抑制剂组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量及Bax、caspase-3的蛋白表达均明显降低（P<0.05），T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达、Sirt1和Bcl-2蛋白的表达和均明显升高（P<0.05）。结论 miR-138在乙醇诱导的大鼠H9C2心肌细胞氧化应激中表达增加，Sirt1可能是miR-138的作用靶点。

SDF1/CXCR4信号轴在退变髓核细胞诱导血管新生中的作用

张晗祥 何斌 胡侦明

2019, 39(5):  682-689. 

摘要 ( 301 )   PDF (3553KB) ( 359 )  

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目的 探讨髓核细胞（NPCs）分泌的基质细胞衍生因子1（SDF1）对退变椎间盘血管化的影响及相关分子机制。方法 培养退变椎间盘NPCs，病毒转染分别上调和下调SDF1表达，根据SDF1表达情况分为DOWN、D和UP 3组；培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），将不同组NPCs或其条件培养基与HUVECs进行共培养，期间还在共培养体系中加入CXCR4受体抑制剂AMD3100，CCK8检测、细胞迁移实验、管腔形成实验观察HUVECs成血管能力。结果 各组NPCs构建成功，与HUVECs共培养后，CCK8检测、细胞迁移实验、管腔形成实验显示随SDF1表达升高，内皮细胞活力、迁移能力、管腔形成能力也随之升高（P＜0.05）。当加入AMD3100后，内皮细胞活力、迁移能力、管腔形成能力在D组和UP组均受到显著抑制（P＜0.05）。结论 人退变椎间盘NPCs表达SDF1，SDF1/CXCR4信号轴影响内皮细胞活力、迁移能力、成管能力，在退变椎间盘血管化中发挥重要作用。

miR-181a过表达加重H2O2诱导的HUVECs损伤

马从乾 王雅 王娜 杨柯 陈德才

2019, 39(5):  690-695. 

摘要 ( 290 )   PDF (991KB) ( 208 )  

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目的 研究miR-181a在过氧化氢（H2O2）损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中的表达，并探讨miR-181a对H2O2诱导的HUVECs活性和凋亡的影响及其机制。方法 MTT法和流式细胞术法计量测定HUVECs活性和凋亡；qRT-qCR和Western blot测定miR-181a和X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）mRNA及蛋白的表达；Targetscan软件预测miR-181a和XIAP的靶向关系，利用双荧光素酶报告分析和Western blot加以验证。结果 1)H2O2呈剂量依赖性抑制HUVECs活性并促进凋亡（P＜0.05）;2)miR-181a在H2O2处理的HUVECs中显著升高（P＜0.05）;3)敲低miR-181a可明显促进H2O2诱导的HUVECs活性并抑制细胞凋亡（P＜0.05）;4)miR-181a能够与XIAP靶向结合;4)miR-181a过表达可抑制H2O2诱导的HUVECs活性并促进细胞凋亡，外源过表达XIAP可减轻miR-181a调控的HUVECs活性和凋亡。结论 miR-181a通过靶向XIAP抑制H2O2诱导的HUVECs活性，并促进细胞凋亡，加重HUVECs损伤。

右美托咪定减轻脂多糖致大鼠急性肺损伤

韩宏亮 洪道先 陈英 宋俊杰 许远征 庞红利

2019, 39(5):  696-700. 

摘要 ( 258 )   PDF (1220KB) ( 232 )  

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目的 探讨右美托咪定在减轻LPS致大鼠急性肺损伤中的作用及相关机制。方法 将SD大鼠随机分为：对照组，脂多糖组（LPS组，腹腔注射LPS 5 mg/kg）和右美托咪定+脂多糖组（LD组，腹腔注射右美托咪定25 μg/kg+LPS 5 mg/kg）。6h后，收集左肺支气管肺泡灌洗液（BALF），ELISA检测BALF中白细胞介-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量；取右肺组织进行HE染色观察肺组织病理学变化，并进行肺损伤评分；计算肺组织湿重/干重（W/D）的比值；Western blot 检测肺组织中HGMB1、TLR4和TLR2蛋白的表达。结果 与对照组相比，LPS组中肺损伤评分、W/D比值，BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高（P<0.05），且肺组织中HMGB1，TLR2，TLR4的表达上调（P<0.05）；与LPS组相比，LD组中各指标变化显著减轻（P<0.05）。结论 右美托咪定能够减轻LPS致大鼠急性肺损伤，可能与HGMB1和TLRs蛋白表达的抑制有关。

神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAAα3表达的性别差异

冀玉萍 黄科昌 李沅君 李军 韩慧蓉 于剑锋 王桂芝

2019, 39(5):  701-704. 

摘要 ( 247 )   PDF (672KB) ( 260 )  

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目的 探讨不同性别神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区（vLPAG）GABAAα3受体的差异。方法 大鼠24只，雌（F组）雄（M组）各12只，坐骨神经分支选择性损伤（SNI）复制大鼠神经病理性疼痛模型，记录大鼠在各时间点（术前1 d及术后1、3、7和14 d）的机械痛阈和冷痛阈。用Western blot检测vLPAG处GABAAα3受体的蛋白表达。结果 与术前相比，F组与M组大鼠均出现明显的机械痛敏和冷痛敏反应，F组较M组机械痛阈更低（P<0.05），F组冷缩足次数多于M组（P<0.05）；术后14 d vLPAG处GABAAα3受体蛋白表达增加，F组明显高于M组（P<0.05）。结论 神经病理性疼痛雌性大鼠较雄性大鼠更敏感，vLPAG处GABAAα3受体表达的上调可能与大鼠痛阈降低有关。

沉默PTEN基因抑制H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤

王晓景 张明星 陈小亮

2019, 39(5):  705-709. 

摘要 ( 255 )   PDF (541KB) ( 178 )  

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目的 探究肿瘤抑制因子沉默PTEN后对H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤的作用及其机制。方法 将培养的大鼠心肌细胞分为对照组和H2O2处理组（50、100和200 μmol/L）后，试剂盒检测心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放及氧化应激诱导后心肌细胞LDH释放量；流式细胞检测术检测心机细胞凋亡；RT-qPCR和Western blot检测心肌细胞PTEN表达水平及转染siR-PTEN后，RT-qPCR和Western blot检测转染效率；流式细胞检测术检测siR-PTEN在氧化应激诱导后心肌细胞凋亡。结果 与对照组相比，H2O2显著增加心肌细胞LDH释放（P<0.05），细胞凋亡率显著上升（P<0.05）、PTEN mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.05），且呈浓度依赖性；siR-PTEN促进心肌细胞LDH释放和降低细胞凋亡率（P<0.05）。结论 PTEN沉默表达可抑制氧化应激反应导致的大鼠心肌细胞损伤。

贲门癌患者口腔菌群的分布特征

柳安琪 邵丹彤 苏征 刘雨菁 魏文强 陈汶

2019, 39(5):  710-713. 

摘要 ( 278 )   PDF (346KB) ( 221 )  

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目的 描述和比较贲门癌患者和贲门正常对照人群口腔菌群分布特征及差异，为贲门癌的早期筛查提供潜在标记物。方法 选取2015年10月至2016年1月河南省林州市肿瘤医院贲门癌住院患者及2017年8月至2018年1月于同一医院经食管内镜检查贲门正常人群各33人；收集口腔唾液标本并提取DNA，通过Illumina MiniSeq测序平台对其16S rRNA V4区进行双端测序；描述并比较病例及对照人群唾液样本中微生物alpha、beta多样性及其菌群相对丰度。结果 贲门癌患者口腔唾液菌群操作分类单元较正常对照减少（175 vs 198，P < 0.05），而Shannon指数无差异；beta多样性显示两组菌群构成区分明显（P < 0.001）；贲门癌组唾液中占主导地位的氏菌属和韦荣球菌属相对丰度均显著高于对照组（P < 0.001）。结论 贲门癌患者口腔唾液菌群与贲门正常对照相比具有显著差异。

北京地区空气污染对中老年高血压患者血压的影响

裴璐 赵梅朵 徐晶 李昂 梅亚园 许群

2019, 39(5):  714-719. 

摘要 ( 348 )   PDF (1770KB) ( 353 )  

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目的 探究北京地区空气污染对中老年高血压患者血压的影响。方法 招募85例北京市年龄在45~85岁，身体活动能力良好的高血压常住居民。排除现患有其它严重心肺系统疾病、感染或变态反应性疾病者。从各研究对象居住地附近的环境空气监测站收集PM2.5、PM10、SO2、NO2、O3和CO的浓度数据，持续时间为5d。应用线性混合效应模型（单污染物模型、双污染物模型），探究6种空气污染物与血压的相关关系。结果 在单污染物模型中，空气污染物除O3外，其余5种污染物短期暴露使收缩压（SBP）水平升高（P < 0.05）；脉压（PP）随O3暴露水平的增加而降低（P < 0.05）、随SO2的暴露而升高（P < 0.05）。结论 短期暴露于空气污染可导致中老年高血压患者收缩压、脉压水平的升高。

氯沙坦钾下调尿酸性肾纤维化大鼠肾小管上皮细胞尿酸转运蛋白-1的表达

卢守燕 马志刚 黄军悦 李莹屏 黄文辉

2019, 39(5):  720-725. 

摘要 ( 220 )   PDF (2795KB) ( 283 )  

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目的 研究氯沙坦钾对高尿酸血症致尿酸性肾纤维化大鼠肾小管上皮细胞尿酸转运蛋白-1（URAT1）表达的影响。方法 将大鼠随机分为正常组、模型组（以腺嘌呤100 mg/kg+乙胺丁醇250 mg/kg的混悬液灌胃造模）、氯沙坦钾低、中和高剂量灌胃治疗组（分别为25、50 和75 mg/kg?d）。各组于造模后第1、2、3和4周检测大鼠血尿酸、血肌酐、尿素氮、尿酸、尿肌酐和尿酸排泄分数，用HE和Masson染色法观察尿酸性肾纤维化大鼠病理变化，Western blot检测肾小管上皮细胞URAT-1蛋白的表达。结果 随着时间的延长，模型组大鼠血尿酸水平显著高于正常组（P<0.01），尿尿酸水平低于正常组（P<0.01）；各治疗组血尿酸水平下降，尿尿酸水平升高，以高剂量组为著（P<0.05）；模型组肾小管间质损伤指数明显高于同期正常组（P<0.05），氯沙坦钾干预后肾小管间质损伤指数明显降低（P<0. 05）； URAT1蛋白表达在模型组各时间段升高（P<0. 05），且随着病理损害的进展呈现上升趋势，经氯沙坦钾干预后表达显著下降（P<0. 05）。结论 氯沙坦钾可能下调URAT1高表达，显著降低高尿酸血症大鼠的血尿酸水平。

QKI5~miR-124~c-Myc调控通路促进白血病细胞增殖

杨桂花 张春霞

2019, 39(5):  726-730. 

摘要 ( 171 )   PDF (1131KB) ( 238 )  

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目的 研究RNA结合蛋白QKI在人急性髓系白血病中的功能和作用的分子机制。方法 以临床初诊的急性髓系白血病患者为实验组，以正常人为对照组；用RT-qPCR分别检测QKI5、QKI6、QKI7 mRNA在外周血单个核细胞中的表达；用表达QKI5的慢病毒颗粒感染HL-60细胞；RT-qPCR检测QKI5的过表达效果；用CCK-8法检测HL-60细胞增殖；用PI染色结合流式细胞计量术检测细胞周期；用RT-qPCR检测QKI5对miRNA表达的影响。结果 QKI5在实验组表达显著降低于对照组（p<0.05），而QKI6和QKI7未见显著差异；过表达QKI5抑制HL-60细胞增殖和细胞周期的运行；QKI5促进miR-124-3p的产生；miR-124-3通过靶向抑制c-Myc的表达抑制HL-60细胞增殖。结论 QKI5~miR-124~c-Myc调控通路在人急性髓系白血病发生中发挥重要调节作用。

临床研究

病理阳性的巨细胞动脉炎患者的临床特点及其与病理结果的相关性

王玉 张昀 王冬梅 张可悦 尹月 曾学军

2019, 39(5):  731-734. 

摘要 ( 263 )   PDF (389KB) ( 304 )  

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目的 总结颞动脉活检阳性的巨细胞动脉炎患者的临床特点及其与阳性病理结果的相关因素。方法 回顾性复习北京协和医院自1997年1月至2017年12月行颞动脉活检的巨细胞动脉炎（GCA）住院的46例患者的临床资料，并根据病理结果将患者分成两组，进行两组间的分析比较。结果 病理阳性组的年龄明显高于阴性组，而病程则明显比阴性组短。临床表现中，阳性组的头皮触痛、肌痛和非特异性症状明显高于阴性组，而听力下降则低于阴性组。既往史中，病理阳性组有吸烟史和肿瘤家族史的明显少于阴性组。实验室检查中，病理阳性组的淋巴细胞数和血色素明显低于阴性组。进行多元logistic回归检验，淋巴细胞数为阳性病理结果的独立相关因素。结论 颞动脉活检病理阳性组与阴性组在年龄、病程、头皮触痛、肌痛、非特异性症状和听力下降、吸烟史、肿瘤家族史等存在显著性差异，而淋巴细胞数为病理结果的独立影响因素。

复杂肾囊肿行腹腔镜肾部分切除术临床经验探讨

董德鑫 石冰冰 荣石 纪志刚 李汉忠

2019, 39(5):  735-737. 

摘要 ( 368 )   PDF (1631KB) ( 212 )  

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目的 总结复杂肾囊肿行腹腔镜肾部分切除术的临床经验。 方法 回顾性分析北京协和医院诊治的复杂肾囊肿19例，其中男7例，女12例，平均年龄43.3岁（28～59岁）；肾中部9例、肾上极4例和肾下极6例。囊肿平均直径3.32 cm （2.5～5.1 cm）。Bosniak分型的情况：Ⅱ型6例、ⅡF型7例、Ⅲ型4例和IV型2例。结果 本组19例患者均行腹腔镜肾部分切除术顺利。平均手术时间(76±22.4) min （60～130 min）；术中平均出血量38mL（20～100mL）；肾动脉阻断时间平均17.0 min （14～28 min）。手术前后血清肌酐数值对比，无明显变化。术后病理组织学结果：肾透明细胞癌18例、单纯肾囊肿1例，切缘均阴性。结论 腹腔镜肾部分切除术可以完整切除复杂肾囊肿，无论病理结果为良性与恶性，均可以达到治疗目的，可以避免第1次手术囊液种植转移和第2次手术切除肾脏，从而减少手术并发症和医疗隐患。

技术与方法

一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化

胡小青 肖广原 张鹏 陈厚早 刘德培

2019, 39(5):  738-744. 

摘要 ( 326 )   PDF (3512KB) ( 824 )  

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目的 优化和改进质粒提取方法，以提高质粒的提取效率，增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法 分别在室温条件和4°C条件提取质粒，并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒；使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式；将质粒转染哺乳动物细胞，使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平。结果 低温进行质粒提取能够显著提高质粒提取效率（P<0.05），并显著提高其在哺乳动物细胞中的表达效率（P<0.01）。质粒提取的3个步骤：细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感，从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率。结论 成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法。

短篇综述

经自然腔道内镜手术的研究进展

岑柯楠 张斌 李宏

2019, 39(5):  745-749. 

摘要 ( 293 )   PDF (442KB) ( 478 )  

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经自然腔道内镜手术(NOTES)是通过人体自然腔道完成的手术操作，具有创伤小、恢复快和美观等优点而成为研究热点，随着技术设备的研究发展，NOTES手术的入路选择及手术方式不断丰富。

延胡索酸水化酶基因缺陷在子宫肌瘤中的研究进展

王文慧 唐乔乔 冯凤芝

2019, 39(5):  750-754. 

摘要 ( 292 )   PDF (446KB) ( 440 )  

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近年来有研究表明，延胡索酸水化酶（FH）基因缺陷可能与子宫肌瘤的形成有关。本文对FH基因的生物学特点、FH基因缺陷导致子宫肌瘤形成的可能原因以及在不同类型的子宫肌瘤的表达进行综述。旨在为子宫肌瘤患者的临床诊治和预后提供新思路。

钙信号在醛固酮合成中的作用及其调控机制

王芬 童安莉 李玉秀

2019, 39(5):  755-758. 

摘要 ( 307 )   PDF (306KB) ( 363 )  

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血管紧张素II、促肾上腺皮质激素、血钾是刺激醛固酮分泌的重要生理因素，这3种物质均可激活肾上腺皮质细胞膜上电压门控Ca2+通道，引起Ca2+内流，是生理情刺激下醛固酮分泌的共同途径。在醛固酮瘤中，ATP1A1、ATP2B3、CACNA1D和KCNJ5突变均会导致细胞内Ca2+增加。细胞内钙信号将通过Ca2+-CaM-CaMK途径促进醛固酮合成。

医学教育

构建以自主学习为核心的医学遗传学课程评价体系

寻慧 温小军 张迎春 修江帆 杨明

2019, 39(5):  759-762. 

摘要 ( 169 )   PDF (622KB) ( 270 )  

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线上教学工具“雨课堂”结合医学遗传学课程的评价体系改革，做好终结性评价的同时加强形成性评价。应用课件预习、出勤率、课堂答题、阶段小测、案例学习、课后作业和期末闭卷考试等多种形式，分层次分指标从学习态度和效果上量化评价课堂教学和课下自学。课后问卷调查结果显示满意度较高，多元评价体系能有效促进自主学习。

北京协和医学院八年制医学生基于实践的自主学习能力及相关因素分析

柴晶晶 朱华栋 刘继海 张楠 曹孟孟 于学忠

2019, 39(5):  763-768. 

摘要 ( 266 )   PDF (866KB) ( 315 )  

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目的 通过对北京协和医学院八年制自主学习的现况调查，探讨影响自主学习能力的相关因素，为进一步提高八年制自主学习能力提供基础。方法 应用调查问卷方法，评估第5、6及7年医学院八年制在自主学习时间、自主学习资源主要获得途径、自主学习方式、自主学习能力方面的情况，探讨影响自主学习能力的相关影响因素。结果 参与调查分析问卷分析共170份，男74名，女96名，平均每日在自主学习上花费的时间为（106.3±35.7）min。课本、带教老师、师兄师姐是最常用的自主学习资源主要获得途径，PubMed是最常用数据库，其次为UpToDate临床顾问,然后是万方/维普及CNKI。女生在学习焦虑方面明显高于男生（P<0.05）。对自主学习影响因素方面的分析，结果显示家庭经济状况高于当地平均水平组，自主学习能力较高，按照年级分类，第5年自主学习能力总分及策略分量表明显高于第6年，优生的自主学习能力在动机分量表及策略分量表及总分方面均明显高于差生。结论 医学生自主学习能力受众多因素影响，家庭经济状况较好，自主学习时间较长，学习成绩较好的学生，自主学习能力较高。