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2014年 第34卷 第6期    刊出日期：2014-06-05

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研究论文

FGFR2异构体及相关剪接因子在人胚胎干细胞和成体干细胞中的表达

傅歆 谷聪敏 严笠 肖苒

2014, 34(6):  723-728. 

摘要 ( 663 )   PDF (1399KB) ( 642 )  

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目的 比较FGFR2异构体及其剪接因子在人胚胎干细胞（hESCs）及其分化的拟胚体（EBs），以及骨髓间充质干细胞（BMSCs）、脂肪间充质干细胞（ADSCs）和毛囊干细胞（HFSCs）等不同组织来源成体干细胞（ASCs）中的表达。方法 用RT-PCR、免疫荧光染色和流式细胞分析，鉴定hESCs、EBs和ASCs的生物学特性；用real-time PCR比较FGFR2异构体IIIb，IIIc及相关剪接因子的表达。结果 FGFR2的选择性剪接在hESCs，EBs和ASCs中均以IIIc为主。hESCs向EBs分化后IIIb和IIIc的表达及IIIb/IIIc比值均升高，EBs中抑制IIIc表达的剪接因子FOX2和抑制IIIb表达的剪接因子HnRNPA1分别在分化第7天和分化第14天表达升高（P<0.05）。FGFR2异构体在hESCs与HFSCs中的表达水平显著高于在BMSCs和ADSCs中（P<0.01），在BMSCs中的表达水平显著高于在ADSCs中（P<0.05）。多种FGFR2相关剪接因子在hESCs和HFSCs中的表达水平显著高于在BMSCs和ADSCs中（P<0.05）。结论FGFR2异构体及其相关剪接因子在不同分化阶段和组织来源的干细胞中有不同的表达谱。

姜黄素对鼻咽癌细胞系CNE-1 RECK基因表达及甲基化的影响

王柏琦 陈艳华 蒋丽琴 程爱兰

2014, 34(6):  729-733. 

摘要 ( 1720 )   PDF (725KB) ( 35416 )  

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目的 探讨姜黄素对鼻咽癌细胞RECK基因表达及甲基化的影响，并探讨可能的机制。方法 体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1，用1，10和30μmol/L 姜黄素处理后，用Western blot和实时定量PCR分别检测RECK基因以及DNA甲基化酶1（DNMT1）蛋白和mRNA表达；高效液相色谱-电喷雾质谱检测RECK甲基化，同时用MTT检测CNE-1细胞增殖，EMSA法检测核转录因子Sp1的DNA结合活性。结果 CNE-1细胞未刺激时RECK表达水平较低，而经1～30μmol/L 姜黄素处理后，能显著增强RECK蛋白和mRNA的表达(P<0.05)。30μmol/L 姜黄素处理CNE-1细胞后， RECK启动子甲基化水平降低至31% (P<0.05)，全基因组甲基化水平降低39% (P<0.05)，细胞核的甲基化活性减少了71.6% (P<0.05)。同时，姜黄素能显著降低CNE-1细胞中DNMT1蛋白和mRNA表达 (P<0.05)，也能减低CNE-1细胞的存活率 (P<0.05)。此外， EMSA结果显示，姜黄素处理后，CNE-1细胞中Sp1的DNA活性显著降低。结论 姜黄素可能通过能上调RECK基因表达，降低细胞内甲基化水平，从而可能发挥对CNE-1细胞生长抑制作用。

神经干细胞定向分化过程中编码基因表达谱分析

张靖 朱丽媛 阴彬 侯琳 彭小忠

2014, 34(6):  734-739. 

摘要 ( 836 )   PDF (1488KB) ( 532 )  

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目的 探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化。方法 1）神经干细胞培养及定向分化诱导培养； 2）分化神经元、星形胶质细胞的流式分选； 3）针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析，包括基因功能聚类、通路分析等。结果1）经细胞分选获得神经干细胞、神经元、星形胶质细胞； 2）Sox2、Nestin等神经干细胞、神经元及星形胶质细胞的标志性基因表达谱式明显； 3）Wnt通路、Insulin通路、P53通路活性的改变在定向分化细胞类群中存在细胞特异性。结论 提示神经干细胞的分化过程是一个多基因通路综合变化的复杂网络。

肿瘤微环境中乳酸对巨噬细胞表型极化和功能的影响

刘妍 陈翀 曹峰琦 白丽鹏 罗云萍

2014, 34(6):  740-745. 

摘要 ( 1315 )   PDF (1549KB) ( 15660 )  

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目的 研究肿瘤微环境中的乳酸对巨噬细胞表型和功能的影响。方法 在Balb/c小鼠乳腺处接种乳腺癌细胞4T1，研磨肿瘤组织后测其乳酸浓度。以不同浓度乳酸处理RAW264.7巨噬细胞，用流式细胞术，RT-PCR和Western blot检测M1、M2型巨噬细胞的标志分子和NFκB P50/P65。蛋白芯片检测RAW细胞分泌的细胞因子。流式细胞术检测RAW细胞吞噬功能和抗原递呈功能。结果 小鼠乳腺癌组织的乳酸浓度高于正常乳腺组织（P<0.05）。15mmol/L浓度的乳酸可显著上调RAW细胞M2型标志分子的表达（P<0.05），下调M1标志分子的表达（P<0.05），使RAW细胞分泌的M1型细胞因子明显减少（P<0.05），同时使磷酸化NFκB P65降低（P<0.05）。乳酸对RAW细胞的吞噬功能没有明显的影响，但减弱其抗原递呈功能（P<0.05）。结论 在乳酸的作用下，RAW巨噬细胞表型向M2型转变，抗原递呈功能减弱，NFκB参与调控乳酸对巨噬细胞的作用。提示肿瘤微环境中的乳酸对抗肿瘤免疫有较大影响。

CDR3δ2基因修饰??T细胞的构建及其功能鉴定

胡愉 赵慧 王准 何维

2014, 34(6):  746-752. 

摘要 ( 884 )   PDF (1207KB) ( 679 )  

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目的 将全长?9链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的?2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC，制备CDR3δ2基因修饰型γδ T淋巴细胞，研究其抗肿瘤作用。方法 通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCR δ2链及γ9链，构建重组质粒pGEM4Z/δ2(OT3)/A64、pGEM4Z/ δ2(OT10)/ A64和pGEM4Z/γ9/A64；以线性化的重组质粒作为模板，体外合成δ2(OT3)、δ2(OT10)和γ9 mRNA；将δ2(OT3) mRNA和δ2(OT10) mRNA分别与γ9 mRNA共电转染入抗CD3抗体刺激的正常人PBMC；经流式细胞术检测和分选γ9δ2(OT3) T细胞和γ9δ2(T10)T细胞。ELISA及MTT法分别检测上述转染细胞的抗肿瘤作用。结果 CDR3δ2基因修饰的TCRγδ细胞γ9δ2(OT3)T细胞和γ9δ2(T10) T细胞能够分泌较高的IFN-γ及TNF-α（P<0.05），对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用（P<0.05）。结论 基因修饰型γ9δ2 T细胞能够明显增强对肿瘤的杀伤活性，为肿瘤过继免疫细胞的制备提供了新的策略。

侵袭性乳腺癌GATA5基因启动子甲基化的临床意义

王达 刘秋均 张雪梅 李宏江 李昌龙

2014, 34(6):  753-756. 

摘要 ( 879 )   PDF (3562KB) ( 450 )  

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目的 探讨浸润性乳腺癌(IBC)组织中GATA结合蛋白5（GATA5）基因启动子甲基化与mRNA表达的关系及其意义。方法 用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测在62名患者的IBC及配对的癌旁正常组织（MNT）中GATA5基因启动子的甲基化状态。在其中48名患者的浸润性乳腺癌(IBC)及配对的癌旁正常组织（MNT）中,用反转录实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测GATA5 mRNA的表达。结果 GATA5基因在IBC中的甲基化率为48.4% (30/62) (P < 0.001)，MNT中为非甲基化。IBC中GATA5 mRNA表达水平显著低于MNT (P < 0.001)。相比于MNT，甲基化的IBC中GATA5基因具有显著较低的mRNA表达（P < 0.001）。同时GATA5基因在甲基化的IBC组中比在非甲基化的IBC组中具有显著较低的表达倍数变化值（P < 0.05）。结论 GATA5基因启动子甲基化很可能引起其转录失活，与IBC的发生、发展密切相关。

小鼠皮质神经祖细胞分化过程中Twist1的功能

付红烨 阴彬 彭小忠

2014, 34(6):  757-761. 

摘要 ( 138 )   PDF (1888KB) ( 651 )  

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目的 检测Twsit1在小鼠大脑皮质发育过程不同时间点的表达模式，并对其基因功能进行初步研究。方法 在小鼠皮质组织切片中，用原位杂交检测Twist1基因的表达；构建基因的过表达克隆，在小鼠胚胎中，在体转染神经祖细胞检测神经祖细胞的分化情况。结果 在选取大脑皮质发育的四个时间点Twist1均有表达，表达部位以室管膜区为主，过表达Twist1后室管膜区的细胞明显减少（p<0.01），中间前体细胞增多（p<0.05）。结论 Twist1在小鼠大脑皮质发育过程中有表达且在祖细胞表达量较高，Twist1可以促进神经祖细胞分化及迁移。

KLF9基因腺病毒载体的构建及其抗ROS功能

焦涛 崔安芳 常永生

2014, 34(6):  762-766. 

摘要 ( 133 )   PDF (868KB) ( 531 )  

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目的 构建及鉴定KLF9基因过表达的腺病毒载体，初步研究KLF9在对抗反应活性氧方面的功能。方法 克隆KLF9过表达质粒，定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV，Pme I 酶切线性化，转化E.coli. BJ5183（含腺病毒载体pAdEasy-1）感受态细菌，产生重组腺病毒载体。重组载体经过卡那霉素抗性筛选和限制性内切酶分析确认重组后，再用Pac I 线性化重组质粒，回收，转染293A细胞，7-12 d包装产生病毒颗粒。利用H2O2和过表达KLF9的腺病毒处理体外培养的C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞，实时定量PCR检测KLF9和抗ROS基因（CAT、SOD2和GPx1）的表达。结果 H2O2可以刺激C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞KLF9和抗ROS基因的表达上调（P<0.05）。定量PCR以及Western blot结果显示成功包装过表达KLF9腺病毒，感染效率达90％以上。过表达KLF9可以上调抗ROS基因的表达水平（P<0.05）。结论 初步认定KLF9基因可参与C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞中抗ROS基因的调节。

利用流式细胞术检测LPS刺激活化后小鼠腹腔巨噬细胞体积的变化

刘音 刘硕 王文蝶 朱军 陈朱波 姜明红

2014, 34(6):  767-770. 

摘要 ( 718 )   PDF (936KB) ( 36988 )  

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目的 探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖（LPS）刺激活化后体积的变化。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24 h后，用倒置显微镜观察细胞的形态，用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量，用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积。结果 小鼠腹腔巨噬细胞在正常状态下呈圆型，细胞边缘光滑无伪足，胞质内无空泡。经LPS刺激3 h后，小鼠腹腔巨噬细胞的表面积变大，伸出伪足，伪足的数量和长度随时间延长而逐渐增多和增长，胞质内的空泡也逐渐增加； 24 h后，细胞表面积明显增大，伪足牵拉使细胞形状呈梭型。LPS处理后细胞上清中IL-6的含量较对照组显著增加（P < 0.01）。流式细胞术检测发现细胞的前向角散射光（FSC）的数值（代表细胞大小）随LPS刺激时间的延长而增加，3和24 h分别增加了11%（P < 0.05）和20.2%（P < 0.01）；侧向角散射光（SSC）的数值（代表表面颗粒数）也逐渐增加，3和24 h分别增加了21.6% （P < 0.05）和68% （P < 0.01）。结论 流式细胞术可以定量检测小鼠腹腔巨噬细胞经LPS活化后的体积变化，为天然免疫细胞的活化研究提供了新的检测手段。

AZD8055抑制肝癌huh7细胞增殖和促细胞凋亡

李鹏 王亚红 杨拉维 杨腾 何香红 黄海丽

2014, 34(6):  771-775. 

摘要 ( 129 )   PDF (887KB) ( 649 )  

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目的 探讨AZD8055对肝癌细胞增殖和克隆形成能力的影响以及其分子机制。方法 肝癌细胞系huh7随机分为对照组（DMSO）和加药组（AZD8055），MTT检测huh7细胞增殖，平板克隆实验检测肝癌细胞克隆形成能力，AnexinV/FITC双染法检测细胞凋亡率，免疫印迹检测AMPK蛋白表达和磷酸化水平。结果 AZD8055抑制肝癌细胞的增殖呈浓度和时间依赖性（P<0.05）。AZD8055处理导致肝癌细胞克隆数目减少以及诱导细胞发生凋亡（P<0.05）。AZD8055处理引起AMPK蛋白磷酸化水平上升，而对总蛋白表达水平影响不大。AMPK蛋白抑制剂Dorsomorphin通过抑制AMPK蛋白磷酸化水平降低AZD8055对肝癌细胞的抑制作用。结论 AZD8055可以抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成能力，并且主要通过调节AMPK蛋白的磷酸化水平实现其对增殖的抑制作用。

小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

韩为 阴彬 彭小忠

2014, 34(6):  776-781. 

摘要 ( 164 )   PDF (1608KB) ( 517 )  

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目的 探索多聚胞嘧啶结合蛋白2（PCBP2）表达下调对P53相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系（T98G、U87MG和U251）各分为2组，分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA（siRNA）和对照siRNA，用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响，同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测细胞增殖能力，Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调（P < 0.05）；增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达（P < 0.05）；抑制FHL2蛋白（P < 0.05），但并不结合其mRNA的3’非编码区（3’UTR）；BrdU阳性细胞减少（P < 0.05）；Hoechst染色阳性细胞增多（P < 0.05）。结论 抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性，并减弱细胞增殖能力，诱导细胞凋亡。

mRNA电转抗CD3抗体刺激的PBMC方法的建立

胡愉 赵慧 王准 何维

2014, 34(6):  782-786. 

摘要 ( 201 )   PDF (1180KB) ( 583 )  

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目的 建立信使RNA（mRNA）电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞（PBMC）的方法，为制备基因修饰CDR3δ移植型γδ T淋巴细胞，为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法 以SpeⅠ内切酶消化重组pGEM4Z/EGFP/A64质粒，回收纯化线性化的重组质粒pGEM4Z/EGFP/A64，体外转录成mRNA；在电转参数为500V，500?s；400V，500?s或300V，500?s等不同条件下，转染抗CD3抗体刺激的人PBMC；用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达；台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率，以确定mRNA电转最佳条件。结果 pGEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切，获得了线性化的质粒；体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白（EGFP ）mRNA； 与其他转染条件相比，在500V，500?s电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞，电转后48h绿色荧光蛋白表达量较高；与其他转染条件相比，在500V，500?s电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞，电转48h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%；台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率，在细胞电转48h后，500V，500?s参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论 电转参数为500V，500?s的条件，可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC，以制备基因修饰T淋巴细胞。

视交叉上核损毁对小鼠疼痛日节律行为的影响

张靖 阴彬 孙中生 彭小忠

2014, 34(6):  787-791. 

摘要 ( 202 )   PDF (2071KB) ( 697 )  

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目的 通过建立视交叉上核（SCN）损毁实验建立小鼠节律调控中枢失能模型，观察中枢节律控制中心SCN对疼痛节律行为的影响。方法 1）12小时 (h) 光照/12小时黑暗条下观察小鼠甲醛诱导的炎性痛反应的节律波动； 2）SCN损毁建立小鼠节律中枢失能模型，观察小鼠转轮节律行为紊乱； 3）观察SCN损毁后小鼠甲醛诱导的炎性痛日节律波动特征的改变。结果1）12h光照/12h黑暗条下小鼠的甲醛诱导炎性痛存在日节律波动； 2）SCN损毁后小鼠正常的炎性痛日节律波动特点明显改变，出现活动期与静息期波动峰值的反转。结论 提示脑内的节律调控中枢SCN对小鼠炎性痛的节律波动具有中枢调控作用。

不同载荷运动对去势雌性大鼠骨关节软骨形态学及代谢的影响

蔡枭 安洪 胡庭义 陈潇 范伟

2014, 34(6):  792-796. 

摘要 ( 111 )   PDF (1482KB) ( 523 )  

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目的 研究不同载荷情况下，运动对去势大鼠骨关节软骨形态学和代谢方面的影响。方法 SD大鼠在成功制备为骨质疏松模型后，随机分为安静组、低载荷运动组、中载荷运动组和高载荷运动组，各10只进行跑台运动；运动3个月后处死大鼠，收取膝关节标本及血液，进行大鼠血清相关物质的检测，进行关节软骨形态学（HE染色、番红O染色、甲苯胺染色）检查及免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白含量。结果 形态学及血清检测结果表明，中载荷运动组有利于维持关节软骨的稳态（p<0.05）；而与安静组、低载荷和中载荷运动组相比较，高载荷运动组则不利于关节软骨的生长，使关节软骨出现退变样改变（p<0.05）。结论 不同载荷运动对大鼠膝关节软骨的影响不同，适度载荷运动对预防和治疗骨质疏松有较好的临床指导意义。

基于金属增强荧光的高通量碱基突变的筛查

徐瑶 郑直

2014, 34(6):  797-801. 

摘要 ( 129 )   PDF (1030KB) ( 453 )  

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目的 开发简单特异的金属增强荧光方法以区分含突变位点和完全互补配对的核酸序列。方法 靶标能通过toehold调节的链置换反应将固定在96孔板表面的发卡结构核酸打开，再加入5'端修饰了羧基荧光素的信号探针，该探针能与另一段打开的捕捉探针杂交，通过检测荧光信号实现对靶标的分析。结果 相对于一般方法，金属增强荧光（MEF）能明显区分互补配对靶标和含突变靶标，并具有显著的信号放大作用（对于100 nmol/L的靶标，信号放大~13倍），能检测出0.1nmol/L级别的靶标（普通方法5nmol/L）。结论 为核酸突变检测提供了一种简便高通量的初筛手段。

应用组织特异性分子的保守序列鉴定人源细胞的组织来源

孙昊 刘玉琴 卞晓翠 杨振丽 赵晓梅

2014, 34(6):  802-809. 

摘要 ( 136 )   PDF (1385KB) ( 508 )  

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目的 建立一种有效简便经济的检测方法，用于鉴定培养细胞的组织来源，对新鲜取材细胞的归类，检测细胞组织来源。方法 根据文献报道与NCBI数据库设计了17对组织特异性相关引物，分别针对16个常见的人类组织特异性因子的mRNA保守序列，培养细胞，提取mRNA，反转录为cDNA，以此为模板进行PCR，琼脂糖凝胶电泳分析；对这些引物进行特异性和敏感性的筛选；其中8对引物可用于判断人类组织特异性，以双盲实验对此方法进行验证，用于鉴定人类细胞的组织来源。结果 17对组织特异性相关引物中，特异性分子ALB、AFP、SYN、CDH16、SFTPB、LCA、FLT和MUL2的对应引物可有效应用于鉴定细胞是否源自肝、肾、神经、肺、造血、内皮和分泌组织；特异性因子PSA对应引物可广泛在人类各组织细胞中扩增出条带；鉴定其他组织的引物有待进一步研究完善优化。结论 应用反转录聚合酶链式反应扩增编码组织特异性分子mRNA的保守序列可以准确的鉴定待检测细胞的组织来源。本研究为鉴定常见细胞的组织来源，提供新方法。

吉非替尼结合化疗在复治的晚期非小细胞肺癌中的疗效

贾宁 赵南婕 宁晓红 孟长婷 王颖轶 王毓洲

2014, 34(6):  810-813. 

摘要 ( 148 )   PDF (419KB) ( 723 )  

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目的 分析吉非替尼结合化疗与单纯化疗比较治疗既往吉非替尼和化疗失败的晚期非小细胞肺癌的临床疗效。方法 用配对病例对照研究设计法，在2006年1月至2011年6月间接受吉非替尼结合化疗或单纯化疗的既往吉非替尼和化疗失败的晚期非小细胞肺癌中，共有33对在性别、年龄(<65岁或≥65岁)、ECOG评分（0~1分或2分）、初次吉非替尼治疗的无进展生存期（4~6个月或>6个月）、既往化疗方案以及诊断时的肿瘤特征方面相匹配。 结果 两组患者中位随访时间为14.5个月，吉非替尼结合化疗组与对照组的有效率分别为9.1% 和6.5%，疾病控制率分别为39.4% 和30.3%，中位总生存期（自首剂吉非替尼始）分别为10.4和7.9 个月，中位疾病无进展生存期分别为4.2和3.3个月。 结论 本回顾性研究结果提示吉非替尼结合化疗与单纯化疗比较治疗既往吉非替尼和化疗失败的晚期非小细胞肺癌的临床结果无明显差异。

华蟾素注射液抗肝癌细胞多药耐药性的蛋白质组分析分析

韦艳 卢珩 王荣荣 陆艳玲 梁钢

2014, 34(6):  814-818. 

摘要 ( 106 )   PDF (753KB) ( 738 )  

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目的 在蛋白表达水平上探讨华蟾素注射液对抗人肝癌多药耐药的机制。方法 体外培养人肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-7402/FU,MTT法测定华蟾素注射液细胞毒性及耐药逆转作用。双向凝胶电泳与质谱技术检测0.26mg/L 华蟾素注射液作用于耐药细胞株前后的差异表达蛋白,western blot验证质谱鉴定的蛋白FAK、CRT和TMOD3表达情况。结果 华蟾素注射液对细胞Bel-FU的IC50为0.66mg/L ,浓度为0.08、0.16及0.32mg/L 华蟾素注射液的耐药逆转倍数分别为1.56、2.18及2.99倍；0.26mg/L华蟾素注射液作用后，耐药细胞中13个蛋白点表达下调，另有1个蛋白点表达上调。华蟾素注射液下调耐药细胞中FAK、CRT和TMOD3表达，与双向凝胶电泳以及质谱技术检测的差异表达蛋白变化一致。结论 华蟾素注射液可引起耐药相关蛋白表达变化而逆转多药耐药。

自然反义转录物Lmo4as对神经系统重要编码基因Lmo4的调节功能

张靖 吴朝 朱丽媛 阴彬 侯琳 彭小忠

2014, 34(6):  819-823. 

摘要 ( 138 )   PDF (2016KB) ( 465 )  

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目的 探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1）使用cDNA末端快速扩增（Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE）与RT-PCR技术，验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸（polyA）尾，克隆Lmo4as的全长序列； 2）使用实时定量PCR和原位杂交技术确定了Lmo4as及相应编码基因的时空表达谱； 3）使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用。结果1）Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸（polyA）尾的非编码RNA转录本，获得其RNA全长信息； 2）Lmo4as与相应编码基因转录本Lmo4的丰度在时间上具有协同性，而在空间表达上具有明显不同的分布； 3）Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用，另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达。结论 提示编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与microRNA的调节共同发挥作用。

不同时期花粉症患者外周血淋巴细胞亚群的数量变化及其临床意义

刁颖 孙劲旅 汤蕊 顾建青 李挚

2014, 34(6):  824-827. 

摘要 ( 147 )   PDF (990KB) ( 544 )  

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目的 研究花粉症患者发作期和非发作期外周血淋巴细胞亚群的比例水平及其临床意义。方法 用血细胞分析仪和流式细胞仪对20例花粉症患者在发作期和非发作期外周血细胞计数和淋巴细胞亚群分析。结果 花粉症患者发作期与非发作期比较，外周血嗜酸性、嗜碱性细胞、CD8+CD28+和CD8+CD38+T细胞显著升高（P<0.05），自然杀伤NK细胞显著降低（P<0.05），B淋巴细胞、T淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD4+CD28+T细胞无明显变化。结论 花粉症患者发作期CD8+CD28+和CD8+CD38+T细胞处于激活状态，在过敏性炎性反应中发挥重要作用。

小鼠脊髓损伤后周细胞促进脊髓血管新生

荆瀛黎 武清斌 苑晓晨 李炳蔚 刘明明 张晓艳 刘淑英 李宏伟 修瑞娟

2014, 34(6):  828-833. 

摘要 ( 252 )   PDF (2688KB) ( 359 )  

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目的 探讨脊髓损伤后周细胞对微血管的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为：假手术组、损伤后2、7和14 d组（S2、S7和S14），每组9只。损伤组采用改良 Allen’s 法制作中度脊髓损伤模型。给小鼠颈静脉注入番茄凝集素（LEA），检测灌注微血管面积；用免疫荧光和免疫组化检测微血管面积和数目；用免疫荧光检测周细胞覆盖率。用缺氧条件（95% N2，5% CO2）模拟脊髓损伤的病理条件，用基质胶系统检测内皮细胞成管。结果 与假手术组相比，S2组灌注血管面积，微血管面积和数目显著降低（P < 0.001）。与S2组相比，S7组微血管数目和面积显著增高（P < 0.05）；S14组灌注血管面积、微血管数目和面积均显著增高（P < 0.05, P < 0.01），但平均值仍低于假手术组。与假手术组相比，S2和S7组周细胞覆盖率持续下降（P < 0.001）。周细胞与内皮细胞共培养可显著增加缺氧条件下内皮细胞成管长度（P < 0.01）。结论 脊髓损伤后周细胞可促进脊髓血管新生。

利用RIP-Chip筛选结合多聚胞嘧啶结合蛋白2的microRNAs

韩为 林细华 阴彬 彭小忠

2014, 34(6):  834-839. 

摘要 ( 139 )   PDF (676KB) ( 443 )  

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目的 通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术（RIP-Chip）在人正常神经胶质细胞（HA）和神经胶质瘤细胞（T98G和U87MG）中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2（PCBP2）相互作用的microRNA（miRNA）。方法 选择兔抗人PCBP2抗体，用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达。用兔IgG作为阴性对照，收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品，通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果，利用NanoDrop定量并经Agilent 2100 检测RNA完整性。选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交，筛选富集4倍以上且P值< 0.05的miRNA。结果 用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验，最终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA，1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA；其中15条存在PCBP2的结合位点。结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA。

临床园地

PET/CT 在诊断克罗恩病中的应用

严雪敏 朱朝晖 孙钢 钱家鸣

2014, 34(6):  840-843. 

摘要 ( 144 )   PDF (816KB) ( 637 )  

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目的克罗恩病的诊断及鉴别诊断十分困难。探讨18F-PET/CT检查对其诊断的价值。方法：收集并分析2012年6月至2012年8月间北京协和医院消化科3例临床诊断较困难的炎症性肠病患者的临床资料，及PET/CT检查对其诊断的价值。结果患者1行18F-PET/CT检查提示结肠节段性病变，其肠道SUV值与肝脏类似；患者2行18F-PET/CT检查提示肠道多发节段性病变，病变肠道SUV值2倍于肝脏。均诊断为炎症性肠病，克罗恩病可能性大，予相应治疗后效果较好；患者3行18F-PET/CT检查提示病变肠道SUV值4倍于肝脏，不除外肿瘤。经手术证实为肠道T细胞淋巴瘤。结论：对疑似克罗恩病的患者，18F-PET/CT是一种很好的无创检查手段。目前，昂贵的检查费用限制了18F-PET/CT检查的广泛应用。

研究短文

二十味沉香丸增强低氧性肺动脉高压大鼠肺组织PKC-α表达

王海燕 王刚 张晓岩 李菊英 贺菊香 李生花

2014, 34(6):  844-846. 

摘要 ( 150 )   PDF (910KB) ( 513 )  

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siRNA沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞迁移能力的影响

范芳 庄海 李长福

2014, 34(6):  847-848. 

摘要 ( 115 )   PDF (487KB) ( 384 )  

相关文章 | 计量指标

罗格列酮对BIU-87膀胱癌细胞株转移能力的影响

何毅 李映川 章卓

2014, 34(6):  849-850. 

摘要 ( 102 )   PDF (426KB) ( 422 )  

相关文章 | 计量指标

氢气能减少人肺上皮细胞株缺氧/复氧损伤后炎性因子释放

刘军肖 韩晨燕 付国俊

2014, 34(6):  851-852. 

摘要 ( 127 )   PDF (434KB) ( 453 )  

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短篇综述

Toll样受体与特应性皮炎的研究进展

王晓菲 刘军连 司少艳

2014, 34(6):  853-856. 

摘要 ( 158 )   PDF (493KB) ( 812 )  

相关文章 | 计量指标

Toll样受体是（TLRs)是目前研究最深入的模式识别受体（PRR），通过识别和结合特异配体，激活信号通路，诱导固有免疫反应，调节获得性免疫反应，在机体的过敏、抗病毒感染、慢性炎症中发挥重要作用。特应性皮炎（AD）是一种常见的皮肤病，以剧烈瘙痒、皮肤屏障结构破坏、对病原体易感性增加为特点。本文就TLRs在AD病人中的表达、基因多态性、维生素D（VitD）通过调控TLRs影响AD的发病，以及TLRs在AD发病机制中的作用进行综述。

骶神经刺激治疗脊髓损伤后肠道功能障碍研究进展

刘浩 白春宏

2014, 34(6):  857-860. 

摘要 ( 143 )   PDF (527KB) ( 525 )  

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骶神经刺激作为治疗脊髓损伤后肠道功能障碍的一种新型方法，已经逐渐应用于临床。其机制可能与传入和局部反射通路的调节有关，刺激参数主要根据个体来确定，主要临床评价指标为Cleveland临床便秘评分和生活质量评分。

参与视网膜色素上皮细胞抗氧化应激的重要分子

曾建平 罗玉萍 李思光

2014, 34(6):  861-865. 

摘要 ( 118 )   PDF (879KB) ( 742 )  

相关文章 | 计量指标

慢性氧化应激与许多视网膜病变相关疾病发生相关。氧化应激引起视网膜色素上皮（RPE）胞内蛋白质、脂质、DNA以及细胞器损伤，导致RPE功能紊乱。目前，RPE氧化应激的分子机制及其调控过程尚不清楚。最近研究发现，一些重要的分子伴侣、转录因子以及microRNAs参与了RPE抗氧化应激过程的调控，这些发现为视网膜病变相关疾病治疗策略的制定提供了新思路。

RUNX3参与抑制消化系肿瘤的进展

武雪亮 王立坤 薛军 贾光辉 屈明 赵秀芳

2014, 34(6):  866-869. 

摘要 ( 141 )   PDF (538KB) ( 469 )  

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RUNX3是人runt相关转录因子家族中的一员,它参与细胞的增值、生长与凋亡的调控。RUNX3表达的异常如杂合缺失、高甲基化与多种恶性肿瘤的发生、发展以及预后有明显的关系，尤其在胃癌、结直肠癌及肝癌的发生、发展中发挥着重要作用。

医学教育

从协和看医学精英教育的本原和逻辑

马天龙

2014, 34(6):  870-872. 

摘要 ( 96 )   PDF (496KB) ( 650 )  

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北京协和医学院近100年的发展历程，几经沧桑巨变并在惊涛骇浪和沧桑风雨中砥砺前行，不断推进着资源要素、培养体系、制度模式三者互相促进的良性循环和发展进步。这一切都是从根本上深刻诠释着医学精英教育的本原和逻辑，具体来讲，就是“明确的目标定位”、“科学的办学理念”、“有效的资源路径”、“健全的大医学体系”和“系统科学的培养模式和机制”。