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2013年 第33卷 第7期    刊出日期：2013-07-05

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研究论文

PcG蛋白EZH2在全反式维甲酸诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的作用

张艳敏 漆正宇 郭新 崔光辉 秦洁

2013, 33(7):  787-792. 

摘要 ( 892 )   PDF (1253KB) ( 543 )  

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目的 探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在小鼠iPS细胞系IP14D-1向生殖细胞分化过程中的作用。方法 将小鼠iPS细胞系IP14D-1通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤，1μmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7d，采用实时RT-PCR、荧光定量RT-PCR、免疫荧光检测atRA处理前后EZH2和生殖细胞分化标志性基因Stra8在iEBs中的表达。结果 在atRA诱导IP14D-1来源的iEBs中，EZH2表达在诱导后2d达到高峰，伴随atRA诱导，EZH2表达减弱；而生殖细胞分化标志性基因Stra8其变化特点与EZH2相反，无atRA诱导时EBs表达Stra8较弱，伴随atRA诱导，Stra8表达增强。EZH2和Stra8阳性信号分别定位于胞膜和胞质，其变化特点与PT-PCP结果相一致。结论 atRA诱导使EZH2低水平表达时期提前出现，伴随Stra8增强表达，启动了小鼠iPS细胞向生殖细胞的分化进程。

S100A6上调人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin及其机制

武睿 段亮 叶立伟 张昀源 陈娴 王海燕 杨霞 罗进勇 周兰

2013, 33(7):  793-798. 

摘要 ( 1091 )   PDF (1378KB) ( 525 )  

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目的 探讨钙细胞周期蛋白S100A6对人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin的影响及其机制。方法 分别用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6与AdsiS100A6处理MCF-7细胞，RT-PCR、Western Blot和免疫细胞化学检测β-catenin、E-钙粘蛋白（E-cadherin）和磷酸化糖原合酶激酶3β（p-GSK3β）表达或分布的变化。结果 在MCF-7细胞中，S100A6可以上调β-catenin的蛋白表达水平（P<0.01），但对其mRNA表达无显著性影响；S100A6对E-cadherin的mRNA表达、蛋白质表达水平及分布均无显著性影响；S100A6可以提高β-catenin降解复合体的主要成员GSK3β磷酸化水平（P<0.01）。结论 S100A6上调β-catenin的可能机制是通过促进GSK3β磷酸化失活，而不是通过调节E-cadherin实现的。

钙激活中性蛋白酶介导雌激素增强MCF-7乳腺癌细胞的存活力

刘晓红 王筑婷 李阳 杨莉 雷霆雯 王旭东

2013, 33(7):  799-803. 

摘要 ( 1103 )   PDF (737KB) ( 626 )  

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目的 探讨雌激素(E2)对MCF-7乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶1（CANP-1）基因表达和CANP蛋白酶活性的影响、以及CANP活性在E2增强细胞存活力中的作用。方法 以MCF-7乳腺癌细胞为研究模型、采用RT-PCR法检测mRNA表达、蛋白印迹法观察CANP特异性底物FAK蛋白剪切、血清饥饿诱导细胞死亡、台盼蓝染色及细胞计数法检测细胞存活力。结果 E2（10 nmol/L）可明显刺激乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调，CANP抑制剂则可显著抑制E2诱导CANP-1基因上调；在无血清培养条件下，E2激活CANP活性及增加细胞存活力(14.3±4.9%，P<0.05)，而CANP抑制剂明可显著抑制E2诱导CANP激活以及细胞存活力(19.2±3.9%, P<0.05)。 结论 E2刺激MCF-7乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调并增强CANP活性，后者可能参与介导血清饥饿时E2增强MCF-7细胞的存活力。

葡萄糖通过mTORC1信号通路调控成纤维细胞增殖

宋娇 吴登艳 邢伟 郝进 徐祥 黄宏

2013, 33(7):  804-807. 

摘要 ( 1064 )   PDF (601KB) ( 621 )  

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目的 研究葡萄糖对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法 将小鼠皮肤成纤维细胞培养在含不同浓度葡萄糖的培养基里，用MTT法检测细胞增殖，7-MGTP pulldown实验检测细胞翻译起始情况，Western blot检测 mTORC1信号通路分子的活化。结果 与培养基葡萄糖浓度为5.5mmol/L相比较，当浓度为15mmol/L时， 促进细胞增殖，与7-MGTP结合的翻译起始复合物增加，mTORC1信号通路活化；当25mmol/L时，抑制细胞增殖，与7-MGTP结合的翻译始复合物减少，mTORC1信号通路中与细胞增殖相关的4EBP1和与细胞生存相关的Akt的磷酸化减弱。结论 葡萄糖通过对mTORC1信号通路的双向调节作用调控成纤维细胞增殖。

沉默H2AX食管癌ECA109中MDC1和53BP1斑点的变化

史鸿云 祝淑钗 刘志坤 苏景伟

2013, 33(7):  808-813. 

摘要 ( 1028 )   PDF (1567KB) ( 609 )  

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目的 探讨沉默H2AX后在食管高分化鳞状细胞癌ECA109细胞中应答电离辐射时对MDC1和53BP1的影响。方法 构建沉默H2AX的慢病毒载体，将慢病毒转染食管癌ECA109细胞并检测转染后的沉默效用；免疫荧光检测r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点的情况以及用western blot检测这几种蛋白的表达。结果 1）成功构建了沉默H2AX的 ECA109细胞。2）电离辐射可引起r-H2AX表达量的增加，不引起MDC1和53BP1表达的增加，同时电离辐射诱导产生的r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点变化的规律一致。3）沉默H2AX后的ECA109细胞核内r-H2AX、MDC1和53BP1斑点的数量明显减少，尽管MDC1和53BP1蛋白表达无变化。结论 在ECA109细胞中H2AX是电离辐射后比较早的反应蛋白，可以调节下游MDC1和53BP1斑点的位置。

48,XXYY综合征合并糖尿病1例的X染色体来源和失活偏移分析

潘清蓉 茅江峰 范慧 姚志 徐援

2013, 33(7):  814-818. 

摘要 ( 1191 )   PDF (900KB) ( 626 )  

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目的 初步探讨48,XXYY综合征合并糖尿病患者的临床特点，并分析该疾病的X染色体来源和失活偏移。方法 收集患者的临床资料，抽提患者及其父母的外周血基因组DNA, 应用PCR结合HpaⅡ限制性内切酶消化法分析X染色体来源和失活偏移。结果 患者临床表现及实验室检查完全符合48,XXYY综合征, 使用二甲双胍和睾酮治疗后患者血糖控制平稳。患者X染色体分别来源于父亲和母亲，两条X染色体均为部分失活，偏移度为0.52。结论 48,XXYY综合征合并糖尿病的发病机制可能与睾酮水平低下、胰岛素抵抗有关。48,XXYY综合征多余X染色体来源于父亲，X染色体不一定存在失活偏移。

钙蛋白酶在乳腺上皮转化细胞对雌激素刺激反应中的作用

杨莉 朱筑霞 刘晓红 胡晓霞 王红梅 王旭东

2013, 33(7):  819-823. 

摘要 ( 927 )   PDF (820KB) ( 682 )  

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目的 探讨经雌激素（E2）转化的MCF-10A乳腺上皮细胞对E2刺激的敏感性及细胞内钙蛋白酶（CANP）在E2效应中的介导作用，以深入了解E2的信号转导机制。方法 以E2转化的MCF-10A乳腺上皮细胞为研究模型、用E2（50 nmol/L）刺激细胞，以蛋白印迹法观察蛋白分子量变化，以CANP特异性底物局部黏着激酶 (FAK) 蛋白剪切作为CANP激活的指标, 伤口愈合实验观察细胞迁移变化，CANP抑制剂预处理观察CANP在E2效应中的作用。 结果 转化细胞CANP活性明显高于非转化细胞，表现为前者出现FAK明显蛋白剪切，而后者FAK主要为野生型（125 ku），同时转化细胞迁移明显增强（P<0.01）。E2(10 nmol/L)刺激转化细胞可进一步促进FAK蛋白剪切和细胞迁移（P<0.01），而非转化细胞对E2刺激不敏感。CANP抑制剂-1（ALLN）可有效阻断E2刺激转化细胞FAK蛋白剪切及细胞迁移（P<0.01）。结论 转化细胞对E2刺激的敏感性增加，其机制可能与胞内CANP活性增强有关，提示在转化细胞存在活跃的E2-CANP-FAK信号活动。

环磷酰胺下调大鼠睾丸OCT-4和GDNF表达

常青 杨震 王燕蓉 马文智 黑常春 沈新生

2013, 33(7):  824-828. 

摘要 ( 843 )   PDF (1418KB) ( 529 )  

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目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子OCT-4和GDNF表达的影响。方法 12只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组，每组6只；实验组每天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续3d，用药4周后PAS染色法观察大鼠睾丸组织学变化，精原细胞，生精小管直径和附睾尾部精子数量。免疫组织化学法检测精原干细胞相关分子OCT-4和GDNF表达水平。结果 与对照组比较，实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻，睾丸组织学无明显改变，附睾精子活动度降低，附睾精子和精原细胞数量减少。实验组GDNF表达明显减少，而OCT-4表达水平无明显变化。结论 环磷酰胺短期用药可造成精子发生的损害，其中精原细胞的减少可能与损害后GDNF表达下调有关。

神经调节因子Neuregulin-1 （Nrg1）调节U87-MG细胞的黏附分子L1表达及促迁移作用

赵炜疆

2013, 33(7):  829-833. 

摘要 ( 1115 )   PDF (1037KB) ( 505 )  

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目的 研究神经调节因子Neuregulin-1（Nrg1）对人胶质母细胞瘤U87-MG细胞中细胞黏附分子L1表达及细胞迁移的影响。方法 给予U87-MG细胞重组Nrg1α（rNrg1α, 2.5 nmol/L）24和48 h，RT-PCR观察L1 mRNA表达；给予细胞rNrg1α或rNrg1β（2.5 nmol/L）48h， Western blot检测L1蛋白水平。用Nrg1 siRNA处理细胞，Western blot观察L1蛋白水平，用细胞划伤实验观察细胞迁移。 结果Nrg1α可促进L1 mRNA表达; 与0 nmol/L组相比，Nrg1α及Nrg1β（2.5 nmol/L）均可显著增加L1蛋白水平（p＜0.01， p＜0.05）。与对照siRNA相比，Nrg1 siRNA明显降低Nrg1表达，并伴有L1表达下降。Nrg1 siRNA处理细胞划伤16 h，划伤边缘细胞Nrg1α、Nrg1β及L1荧光信号降低，细胞迁移减弱。 结论 Nrg1可调节U87-MG细胞L1表达，其参与细胞迁移可能与提高L1表达有关。

CB-Aβ抗体偶联物抑制痴呆小鼠脑内Aβ纤维斑块形成

刘建玉 夏春娥 赵雪梅 梁平

2013, 33(7):  834-839. 

摘要 ( 1055 )   PDF (2198KB) ( 491 )  

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目的 研究CB- Aβ多肽抗体（IgG）是否能高效的进入痴呆小鼠脑内，发挥抑制Aβ纤维斑块形成的作用。方法 用改良过碘酸钠法制备CB-IgG偶联物；鼻腔给予C57小鼠CB-IgG后用间接ELISA法测定脑内抗体量；给予C57小鼠抗体3h后用间接ELISA测血清和脑区抗体量；5XFAD小鼠分为CB-IgG IN组，IgG IN组，IgG IV组，阳性对照组和阴性对照组，抗体干预14周后，双抗夹心ELISA检测脑内Aβ水平，免疫组化染色观察Aβ沉积和老年斑。 结果 鼻腔给予CB-IgG 0.3h时在脑内即可检测到Aβ抗体的存在，3h后达峰值；抗体给予3h后，CB-IgG IN组海马区的抗体量高于IgG IN组和IgG IV组10倍以上(P<0.05)，IgG IV组与IgG IN组脑内的抗体量接近；CB-IgG IN组小鼠脑内Aβ水平比阳性对照组显著降低（P＜0.05）；CB-IgG IN组海马和皮层区的老年斑面积与阳性对照组相比分别减少了80％以上。 结论 鼻腔给予CB-IgG的方式，在提高抗体入脑量、抑制痴呆鼠脑内Aβ纤维斑块形成等方面均优于其他途径和措施。

肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

王冠洲 叶飞 赵阿妮 韩为 阴彬 彭小忠

2013, 33(7):  840-844. 

摘要 ( 843 )   PDF (1072KB) ( 474 )  

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目的 构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法 用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi’an株的cDNA，装入pBR322载体。将该克隆线性化，体外转录后转染RD细胞后，通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果 成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi’an株的全长cDNA克隆；体外转录及转染RD细胞60h后可观察到明显的CPE现象；RT-PCR在转染RD细胞中检测到病毒的存在；成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线，最大滴度达到2×107 pfu/ml。结论 成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi’an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性，同时测定了拯救病毒的一步生长曲线，与野生型病毒相近。

优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠血浆MMP-2和MMP-9活性

李炳蔚 苑晓晨 王冰 秦伟伟 李宏伟 刘淑英 修瑞娟

2013, 33(7):  845-848. 

摘要 ( 1223 )   PDF (634KB) ( 952 )  

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目的 以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)与-9 (MMP-9) 的活性。方法 以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础，改变孵育时间、工作液成份，采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品，观察对基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响。并以优化的酶谱法检测Wistar及自发性高血压大鼠血浆MMPs的相对活性。结果 凝胶孵育时间由42 h缩短为17 h不影响酶谱法检测结果。省略漂洗步骤及洗脱液仅使用2.5% Triton X-100、孵育液中去除NaN3及NaCl且电泳后步骤将去离子水更换为蒸馏水也不影响实验结果。孵育液pH值在7.2~8.8范围内均可用于酶谱法。血浆样品反复冻融多达6次不影响酶谱法检测结果。用优化的酶谱法检测结果显示，与Wistar大鼠相比，SHR大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性显著增高。结论 优化酶谱法与常规方法相比更为简便经济，检测大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性所得结果一致。

巨噬细胞增强H2O2抑制人血管内皮细胞和兔血管平滑肌细胞的增殖

李天佳 刘暴 倪冷 来志超 吴立飞 刘昌伟

2013, 33(7):  849-853. 

摘要 ( 1260 )   PDF (980KB) ( 500 )  

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目的 探讨H2O2处理对巨噬细胞分泌因子的影响，及对血管内皮细胞（VEC）及平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法 实验分组：空白对照组，0.5mmol/L H2O2组，巨噬细胞条件培养基组，巨噬细胞+0.5mmol/L H2O2条件培养基组。CCK-8测定VEC和VSMC的增殖情况。ELISA检测白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α），以及血管内皮细胞生长因子（VEGF）。Western blot检测增殖核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白cyclinD1的表达，以及血管内皮细胞内皮源性一氧化氮合酶（eNOS）的表达。结果 VEC中其他3个处理组的增殖水平均低于对照组（P<0.05），而在VSMC中，巨噬细胞组的增殖水平高于空白对照组（P<0.05）。在VEC和VSMC中，巨噬细胞+0.5mmol/L H2O2组的增殖水平均高于单独0.5mmol/L H2O2处理组（P<0.05），且低于单独巨噬细胞处理组（P<0.05）。巨噬细胞分泌的IL-6、IL-10、MCP-1随时间和H2O2的浓度增加而增高(P<0.05)。VEC分泌的VEGF在1.0mmol/L H2O2 浓度时有明显增高(P<0.05)。结论 氧化应激处理可影响巨噬细胞炎性因子的分泌，进而影响血管内皮细胞和平滑肌细胞的增殖。

反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断乙肝病毒C基因表达

邓益斌 温旺荣

2013, 33(7):  854-858. 

摘要 ( 980 )   PDF (995KB) ( 474 )  

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目的 探讨针对乙肝病毒C基因反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断病毒基因表达的效果。方法 各实验组经尾静脉给药后，采用real time PCR、时间分辨免疫荧光技术、免疫组织化学法等技术分别检测血清HBV DNA、HBeAg含量及肝细胞内HBcAg的表达情况。结果 注射锁核酸后，对乙肝病毒核酸的复制和乙肝病毒e抗原的合成均有较强的抑制作用，注射后1、3和5 d，HBV DNA的平均抑制率分别19.24%、39.20%和44.47%; HBeAg的平均抑制分别为30.71%、51.14%和63.46%; 小鼠肝细胞的HBcAg阳性细胞数也较对照组明显减少。结论 针对乙肝病毒C基因的反义锁核酸在转基因小鼠体内能有效抑制病毒基因的复制和表达，提示C基因可作核酸药物治疗的有效靶位。

乳腺癌中RIN1的表达及临床意义

梁欣洁 向庭秀 钟伟洋 张翔 厉红元

2013, 33(7):  859-863. 

摘要 ( 1152 )   PDF (838KB) ( 687 )  

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目的 研究RIN1在乳腺癌中的表达,分析它与乳腺癌预后的关系。方法 用免疫组化SP法检测85例乳腺癌和20例乳腺良性病变组织中RIN1的表达,并对85例乳腺癌病例进行随访；用Real Time PCR和Western blot法检测RIN1在20例乳腺癌和癌旁组织中的表达。Kaplan - Meier分析生存结果。结果 85例乳腺癌标本中RIN1有不同程度表达，其中44例高表达，乳腺癌中RIN1的表达明显高于非癌组织(p﹤0.05)；RIN1高表达与肿瘤大最大直径、组织学分级、肿瘤家族史成正相关(p﹤0.05)；RIN1高表达患者的平均生存时间低于RIN1低表达患者(p﹤0.05)；RIN1高表达影响肿瘤无病生存率(p﹤0.05)。20例标本中RIN1的mRNA及蛋白在乳腺癌的表达明显高于癌旁组织(p﹤0.05)。结论RIN1影响乳腺癌的发生发展，其高表达RIN1可能成为判断乳腺癌预后的一个标记物。

磷酸肌酸减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及自噬泡的数量

刘艺 徐卫娟 柯丽 李云桥 彭雯

2013, 33(7):  864-867. 

摘要 ( 1249 )   PDF (995KB) ( 610 )  

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目的 研究磷酸肌酸减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及自噬的能力。方法 雄性SD大鼠24只，体质量200g～250g，随机均分为假手术（Sham）组、缺血/再灌注（Ischemia-Reperfusion，I/R）组和磷酸肌酸钠（Phosphocreatine，CP）干预组。其中CP组按4 mg/kg磷酸肌酸钠剂量于再灌注前经右股静脉注射。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡；电子显微镜观察心肌细胞自噬泡的发生和线粒体的形态学改变；Western blot检测微管相关蛋白1轻链 3-II (LC3-II)蛋白的表达。结果 I/R组与Sham组相比，线粒体超微结构损伤加重，自噬泡数量增多(P<0.01)，心肌细胞凋亡率明显增加(P<0.01)；CP干预组可减轻I/R组线粒体超微结构损伤，自噬泡数量减少(P<0.05)，降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)；LC3-II作为评价自噬强度的指标，I/R组与Sham组相比，LC3-II蛋白的表达明显上调(P<0.01).；而CP与I/R组相比，该蛋白表达明显下调(P＜0.05)。结论 磷酸肌酸通过减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及自噬泡的数量，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。

2型糖尿病大鼠胰腺中Homer的表达及意义

许淑芳 邹辉 吴三云 涂建成

2013, 33(7):  868-872. 

摘要 ( 1044 )   PDF (888KB) ( 515 )  

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目的 探讨Homer与胰岛素分泌及2型糖尿病发病机制的相关意义。方法 建立2型糖尿病大鼠模型，检测血糖和血胰岛素值。取胰腺组织，采用反转录PCR、免疫组化和免疫荧光方法检测Homer（Homer1c、Homer2、Homer3）和胰岛素的表达。结果 大鼠胰腺组织可见Homer表达，糖尿病大鼠胰腺组织胰岛素表达明显减少（P<0.01），而Homer1c、Homer2和Homer3均表达增加（P<0.05）。结论 Homer基因在大鼠胰腺组织亦有表达，Homer1c、Homer2和Homer3可能对胰岛素分泌起负性调控作用。

猪血纤维连接蛋白促进小鼠Ⅲ度烧伤愈合

陆艳琦 郭华 赵丽娜 叶艳芳 李健 桑喜成 张世阳

2013, 33(7):  873-875. 

摘要 ( 1033 )   PDF (769KB) ( 612 )  

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目的 研究相同浓度下不同纯度纤维连接蛋白对小鼠Ⅲ度烧伤创面愈合的效果及差异。方法 制备小鼠背部Ⅲ度烧伤模型，模型小鼠随机分5组：纤维连接蛋白高纯度组（85%）、中纯度组（75%）、低纯度组（65%）、贝复济阳性对照组以及空白对照组，观察各组创面愈合时间，脱痂时间及病理学变化。结果 不同纯度的纤维连接蛋白与空白对照组比较均能缩短小鼠皮肤创面愈合的时间及脱痂时间，并能显著改善创面皮肤的病理形态。结论 纤维连接蛋白对小鼠Ⅲ度烧伤愈合有显著促进作用，中纯度组可能具有潜在应用价值。

硫酸化胆汁酸水解酶基因BSS H1克隆、表达及活性

洪琳 高秀峰 陈建敏 胡琳 李永生

2013, 33(7):  876-880. 

摘要 ( 908 )   PDF (1193KB) ( 468 )  

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目的 从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶（BSS）基因，并表达蛋白产物、研究其活性。方法 通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1；通过PCR扩增获得BSS H1基因全序列，将其插入pET30b(+)载体，并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过优化诱导表达条件，实现重组蛋白BSS H1的高效表达；通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质。结果 工程菌扩大培养3h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5h时蛋白表达量最高；研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸，在pH 8.5时，其活性分别是（632±65）U/L和（52±4）U/L。结论 成功构建BSS H1高效表达菌株。BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道，其机制尚不明确，值得深入研究。

MiR-146a调节TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移及其分子机制

刘丹 姜明红 刘敏 高静 刘彦信 郑德先

2013, 33(7):  881-887. 

摘要 ( 1101 )   PDF (1836KB) ( 658 )  

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目的 研究miR-146a及其靶基因EGFR对乳腺癌细胞迁移的影响。方法 用终浓度为50、100、200和500 μg/L的重组可溶性TRAIL（rsTRAIL）持续刺激对TRAIL敏感的MDA-MB-231细胞4周，筛选得到TRAIL不敏感的乳腺癌细胞MDA-MB-231/TR。 RT-PCR检测miR-146a的表达；Transwell实验以及划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力；双荧光素酶报告基因分析以及Western blot鉴定MDA-MB-231/TR细胞中miR-146a与EGFR基因的靶向调控关系；Western blot检测DR4、DR5、IRAK1、CXCR4、 p-IκBα、caspase 8和caspase 3的蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀技术（ChIP）分析MDA-MB-231和MDA-MB-231/TR细胞中NF-κB p65亚基与miR-146a启动子区的结合情况。结果 TRAIL细胞毒作用不敏感的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231/TR中miR-146a的表达降低，并引起其靶基因EGFR的表达增加，最终导致TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移能力增强。同时发现NF-κB参与miR-146a低表达的调控。结论 miR-146a对TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移起重要的调节作用。

RNAi介导的pirin低表达降低了K562细胞的红系分化能力

毛群铨 王婕 曹玲玲 薛建有 戚武林 朱晓芳 张世馥

2013, 33(7):  888-891. 

摘要 ( 1164 )   PDF (1088KB) ( 520 )  

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目的 研究pirin低表达对人红白血病细胞系K562红系分化和细胞活力的影响。方法 通过短发卡RNA(shRNA)干扰技术，构建pirin低表达细胞稳定株，用Western blot方法对干扰效果进行检测，并用联苯胺染色和MTT法分别检测干扰pirin后对K562细胞的红系分化和增殖的影响。结果 转染了pirin-shRNA的细胞其pirin的表达量明显低于对照组（随机干扰组），pirin低表达与对照组相比对细胞增殖无影响，但在诱导剂诱导分化过程中，血红蛋白的合成出现了显著性的降低（P<0.05）。结论 pirin低表达不影响K562细胞的增殖能力，但能降低其红系分化能力。

技术与方法

人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系的建立

喻松霞 郭玲玲 贺文凤 贺玲 李洁 李剑

2013, 33(7):  892-897. 

摘要 ( 906 )   PDF (1605KB) ( 684 )  

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目的 拟建立人胚胎干细胞无血清无饲养层的培养体系。方法 将干细胞分别置于Knockout培养基（第1组）、自制无血清培养基（第2组）和添加bFGF及肝素的改良无血清培养基（第3组）中培养25代后观察比较三组干细胞形态学变化、克隆数目及大小。并借助细胞免疫组化、流式细胞术和体外拟胚体形成等方法检测干细胞的未分化状态和全能性。结果 传代25次后，第2组克隆逐渐分化。第1组和第3组的干细胞均呈典型的人胚胎干细胞形态特征；细胞表达Nanog, Oct-4，Tra-1-60，SSEA-4，但不表达SSEA-1；流式检测也显示SSEA-4高表达，SSEA-1低表达；体外分化能形成拟胚体。通过单位视野下克隆个数及大小的比较，结果显示第2组与第1组和第3组间的差异显著。结论 本研究通过改良本实验室已获得国家专利的无血清培养基，初步建立了人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系，培养效果与公认培养体系无明显差异。

Neuralized siRNA表达载体的构建及鉴定

朱美意 单莉娅 郑艳 郝慧鑫 黄瑾

2013, 33(7):  898-903. 

摘要 ( 724 )   PDF (1554KB) ( 533 )  

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目的 构建 Neuralized siRNA 干扰载体并观察其对细胞中 Neuralized 表达水平的影响。方法 化学合成靶向Neuralized 的短发夹寡核苷酸序列，与线性化pGPU6/Neo 质粒退火连接。酶切后测序鉴定正确，转染入HEK293 细胞。利用Western blot 和间接免疫荧光技术分析Neuralized siRNA 载体对细胞中Neuralized 表达及其定位的影响。结果 Neuralized siRNA 干扰载体经酶切及测序分析表明，目的核苷酸序列成功插入预计位点且序列正确；Neuralized siRNA 干扰载体转染HEK293 细胞后，Western-Blot 检测显示，Neuralized siRNA 干扰载体明显降低细胞中Neuralized蛋白表达；间接免疫荧光显示，转染4种Neuralized siRNA 均能影响使定位于细胞膜上的Nneuralized 蛋白的荧光强度。结论 Neuralized siRNA 干扰载体成功构建，且能明显抑制细胞中Neuralized 的表达。

临床园地

HIV感染合并IgA肾病4例临床和病理分析

马杰 文煜冰 于阳 李太生 李雪梅

2013, 33(7):  904-907. 

摘要 ( 1123 )   PDF (518KB) ( 637 )  

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目的 研究HIV感染合并IgA肾病患者的临床和病理特点及治疗转归。方法 选择2002年～2012年在北京协和医院住院的HIV感染合并肾脏损害，并经肾脏活检证实为IgA肾病的4例患者为研究对象，回顾分析这4例IgA肾病患者的临床及病理资料、治疗随诊情况。 结果 4例患者均有不同程度蛋白尿和镜下血尿，血肌酐水平在正常范围，肾脏活检病理提示为不同程度的IgA肾病。4例患者均接受了高效联合抗反转录病毒治疗（HAART）。3例患者的初始治疗使用了ACEI/ARB，其中2例效果不佳联合使用糖皮质激素治疗。1例肾脏病变好转后再次出现大量蛋白尿，考虑与抗病毒药物替诺夫韦有关，调整抗病毒治疗后再次缓解。治疗过程中所有患者的HIV病毒复制并未增加。 结论 HIV感染合并肾脏病变除了经典塌陷型FSGS之外还可以合并IgA肾病，肾脏活检有利于明确诊断并指导治疗。

研究短文

BRL37344增强3T3-L1前体脂肪细胞

张华 边德志 张梅 班博

2013, 33(7):  908-909. 

摘要 ( 819 )   PDF (519KB) ( 528 )  

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干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖

张秀梅 张霞 肖建英

2013, 33(7):  910-911. 

摘要 ( 1027 )   PDF (505KB) ( 551 )  

相关文章 | 计量指标

新生兔骨髓基质细胞向成骨样细胞诱导分化

张林朴 王冠华 代晓华 姚晖

2013, 33(7):  912-914. 

摘要 ( 761 )   PDF (893KB) ( 578 )  

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短篇综述

II型跨膜丝氨酸蛋白酶的最新研究进展

高利娟 董宁征 吴庆宇

2013, 33(7):  915-918. 

摘要 ( 1224 )   PDF (712KB) ( 833 )  

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II型跨膜丝氨酸蛋白酶（TTSPs）是一类通过氨基末端跨膜区域锚定在细胞膜上的丝氨酸蛋白酶。激活后的TTSPs通过其特异性底物参与多种生理和病理过程，功能异常可导致肿瘤、耳聋、缺铁性贫血、心血管疾病等。

斑马鱼——髓鞘损伤与再生研究的理想动物模型

方杨武 李玉皓

2013, 33(7):  919-922. 

摘要 ( 893 )   PDF (539KB) ( 536 )  

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脱髓鞘疾病是以多发性硬化为主要表现的自身免疫性疾病，髓鞘脱失与再生的机制不明，利用动物模型进行深入研究是一个有效途径。新型模式动物——斑马鱼具有发育快速、胚胎透明、遗传学技术成熟等优势，通过构建转基因斑马鱼可以对细胞进行活体、动态观察和基因表达模式分析，是研究髓鞘损伤与再生的理想动物模型。

长链非编码RNA与病毒和微小非编码RNA关系的研究进展

何金花 黎毓光

2013, 33(7):  923-926. 

摘要 ( 1037 )   PDF (517KB) ( 706 )  

相关文章 | 计量指标

非编码RNA，包括以miRNA、siRNA和piRNA等为代表的短小RNA和长链非编码RNA。长链非编码RNA，有别于其他小分子非编码RNA，是目前非编码RNA研究的热点。随着研究的不断推进，人们发现lncRNA与物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等都有着密切的联系。microRNA是一类长度为19～23个核苷酸的内源性非编码 RNA，可以在转录水平或转录后水平调节基因的表达。

登革病毒样颗粒疫苗的研究现状

付春云 戴盛明 周俊梅

2013, 33(7):  927-930. 

摘要 ( 818 )   PDF (546KB) ( 645 )  

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登革病毒引起的疾病是一种严重威胁人类健康的蚊媒性急性传染病。但至今仍没有获批准的疫苗可用。近年，一种新的病毒样颗粒(VLPs)能使免疫小鼠产生中和性抗体和持久、特异的T淋巴免疫记忆细胞。VLPs克服了传统疫苗的很多不足，具有较大应用潜力。

医学教育

临床医学生社区早接触实践课程的现状调查

王艳红 杨萍 徐薇薇 廖巍 潘慧 廖苏苏

2013, 33(7):  931-934. 

摘要 ( 952 )   PDF (457KB) ( 558 )  

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目的 了解临床医学生“社区早接触”课程的参与情况、课程效果和改进建议。方法 对2007级、2008级和2009级临床八年制学生采用问卷调查的方法收集信息（共回收198份问卷）；并对2008级同学组织了两轮小组访谈。结果 1）实践课程使学生对社区卫生服务中心的服务对象、工作内容和性质有一定程度的了解；2）该课程设置在四年级下学期和总计18学时的安排较合理，但上午半日去社区中心的安排有待调整；3）学生更期待了解并参与具有社区特色的工作内容，也希望实践前能增加相关的知识培训。结论 实践课程为学生提供了认识和了解社区卫生服务的平台，但如何使参与课程的不同社区中心都能达到课程质量要求、利用有限的课程时间实现课程目标仍存在挑战。